English大口徑毛細管氣相色譜法快速測定MRS肉湯培養(yǎng)基中水溶性膽固醇
2013-01-19
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建立了MRS 肉湯培養(yǎng)基中水溶性膽固醇的氣相色譜測定法。1 mL 樣品( 含水溶性膽固醇的MRS肉湯培養(yǎng)基) 與5 mL 0． 5 mol /L KOH-甲醇溶液混合，然后于60 ℃水浴皂化30 min。產物游離膽固醇經5 mL甲苯萃取后，采用HP-5 大口徑石英毛細管柱( 30 m × 0． 53 mm i． d． × 1． 5 μm) 進行分離、FID 檢測器進行檢測、外標法進行定量分析。本方法分析一個樣品僅需45 min; 在5 ～ 250 mg /L 濃度范圍內線性關系良好; 回收率為95． 6% ～ 98． 0%; 日內與日間相對標準偏差分別為1． 6%和1． 9%。本方法具有快速、簡便、準確等優(yōu)點。
水溶性膽固醇是一類由人工合成的化學物質，在自然界中并不存在。Proksch 等于1978 年報道了以膽固醇、二元酸和聚乙二醇為原料合成水溶性膽固醇的工藝路線。水溶性膽固醇初被用于質控血清中的膽固醇源，后來其應用范圍逐漸擴展。在微生物學領域，水溶性膽固醇主要用于研究乳酸菌體外對培養(yǎng)基中膽固醇的脫除作用。由于膽固醇本身不溶于水，因此在添加到培養(yǎng)基之前必須進行乳化處理，以使其在水相中能穩(wěn)定存在。而水溶性膽固醇在水中則具有高達60 g /L 的溶解度，無需乳化便可直接添加到培養(yǎng)基中，因而被廣泛應用。
為了模擬腸道環(huán)境，培養(yǎng)基中水溶性膽固醇的添加量通常為100 mg /L 左右。不同乳酸菌對培養(yǎng)基中水溶性膽固醇的脫除能力有很大差別。某些乳酸菌對培養(yǎng)基中水溶性膽固醇的脫除能力可高達80%。這表明當培養(yǎng)結束后，培養(yǎng)基上清液中的水溶性膽固醇的濃度可降低至20 mg /L 左右。硫酸-鄰苯二甲醛比色法是目前能夠對如此低含量膽固醇進行檢測的比色法，因而被廣泛應用。然而，該方法偶爾會出現原因不明的實驗結果不可重復的現象。因此，有必要開發(fā)一種穩(wěn)定性更好的檢測方法。本研究對氣相色譜測定培養(yǎng)基中水溶性膽固醇的方法進行了研究，獲得了較滿意的結果。
為了模擬腸道環(huán)境，培養(yǎng)基中水溶性膽固醇的添加量通常為100 mg /L 左右。不同乳酸菌對培養(yǎng)基中水溶性膽固醇的脫除能力有很大差別。某些乳酸菌對培養(yǎng)基中水溶性膽固醇的脫除能力可高達80%。這表明當培養(yǎng)結束后，培養(yǎng)基上清液中的水溶性膽固醇的濃度可降低至20 mg /L 左右。硫酸-鄰苯二甲醛比色法是目前能夠對如此低含量膽固醇進行檢測的比色法，因而被廣泛應用。然而，該方法偶爾會出現原因不明的實驗結果不可重復的現象。因此，有必要開發(fā)一種穩(wěn)定性更好的檢測方法。本研究對氣相色譜測定培養(yǎng)基中水溶性膽固醇的方法進行了研究，獲得了較滿意的結果。
